液相色譜熒光檢測器(FLD)是一種高靈敏度、高選擇性的檢測器，適用于能產(chǎn)生熒光的化合物或經(jīng)衍生化后發(fā)光的物質(zhì)。其核心優(yōu)勢在于靈敏度可達(dá)紫外檢測器的很多倍，且抗干擾能力強(qiáng)。
熒光檢測器的工作機(jī)制基于光致發(fā)光現(xiàn)象，核心步驟如下：
激發(fā)光照射光源(常用氙燈、汞燈或激光二極管)發(fā)射特定波長的激發(fā)光，通過單色器(光柵或?yàn)V光片)篩選出單一波長的激發(fā)光束，聚焦于色譜柱的流出液(檢測池)中。當(dāng)待測組分分子吸收激發(fā)光能量后，會從基態(tài)(穩(wěn)定態(tài))躍遷到激發(fā)態(tài)(高能態(tài))。
熒光發(fā)射處于激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，會在很短時間內(nèi)(10??～10??秒)通過非輻射躍遷損失部分能量，回到激發(fā)態(tài)的*低振動能級，再通過輻射躍遷釋放出光子，回到基態(tài)，這個過程產(chǎn)生的光就是熒光。熒光的波長總是大于激發(fā)光波長(斯托克斯位移)，這是熒光檢測的關(guān)鍵特征。
信號采集與轉(zhuǎn)換為了避免激發(fā)光的干擾，檢測器的熒光接收系統(tǒng)(光電倍增管 PMT 或光電二極管)通常與激發(fā)光光路呈 90° 角 放置。發(fā)射的熒光經(jīng)單色器篩選出特征熒光波長后，被光電檢測器接收并轉(zhuǎn)換為電信號。電信號強(qiáng)度與待測組分的濃度在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，后經(jīng)放大和數(shù)據(jù)處理，得到色譜峰和定量結(jié)果。
檢測流程：
激發(fā)光源(如氙燈或激光)發(fā)出連續(xù)光譜，經(jīng)單色器分光后選擇特定波長作為激發(fā)光。
激發(fā)光照射樣品池中的熒光物質(zhì)，產(chǎn)生熒光。
熒光信號通過直角方向的光路(避免激發(fā)光干擾)被光敏元件(如光電倍增管)檢測，并轉(zhuǎn)換為電信號。
電信號經(jīng)放大后傳輸至數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，生成色譜圖。
液相色譜熒光檢測器以其高靈敏度和高選擇性成為痕量分析的重要工具，尤其適用于生物、環(huán)境等領(lǐng)域。然而，其非通用性和對干擾的敏感性限制了應(yīng)用范圍。通過結(jié)合激光光源、聯(lián)用技術(shù)或衍生化方法，可進(jìn)一步拓展其分析能力，滿足復(fù)雜樣品檢測需求。
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